Diluizione per piastra contabile

Inserisca la densità vitale stimata in CFU per millilitro, il volume depositato su una piastra e i limiti inclusivi di colonie che Lei accetta per il metodo. Il risultato riporta fattore e frazione consigliati, conteggio previsto e intero intervallo delle diluizioni ammissibili. Viene preferita una pratica potenza di dieci quando resta nell’intervallo; altrimenti viene usato il valore esatto diretto al punto medio geometrico.

Inserisca una stima coerente con il metodo di semina

Parta dalla concentrazione stimata di microrganismi vitali nel campione originale, espressa in unità formanti colonia per millilitro. Può derivare da una precedente conta vitale, da una curva di crescita convalidata o da un’altra stima documentabile e deve descrivere il campione prima della diluizione. Indichi poi in millilitri il volume che raggiungerà effettivamente una piastra. Una semina per spatolamento di 100 microlitri equivale a 0.1 millilitri, mentre una semina per inclusione di 1 millilitro usa 1. Il volume incide direttamente: raddoppiandolo, raddoppiano le colonie previste a parità di densità e diluizione. Definisca infine i limiti inclusivi adatti al metodo, all’organismo, al terreno e alla procedura del laboratorio. Il calcolatore non impone un intervallo universale, poiché metodi convalidati possono adottare soglie diverse. Consideri la risposta una raccomandazione di pianificazione, non una garanzia. Aggregazione, vitalità, miscelazione, pipettaggio, recupero sul terreno e variabilità biologica possono cambiare la conta osservata. Se l’incertezza è elevata, prepari diluizioni adiacenti e repliche. Converta sempre i microlitri in millilitri prima dell’invio.

Interpreti l’intervallo e la diluizione consigliata

Il calcolo inizia dalla conta prevista senza diluizione: CFU stimate per millilitro moltiplicate per i millilitri seminati. Dividendo questo valore per il fattore di diluizione si ottengono le colonie attese. Il fattore accettabile minimo corrisponde al limite superiore di colonie, mentre quello massimo corrisponde al limite inferiore. Poiché un fattore minore di uno rappresenterebbe una concentrazione, l’intervallo è limitato a fattori almeno pari a uno. Il calcolatore cerca prima una potenza di dieci, come 100, 1,000 o 100,000, la cui previsione rimanga nell’intervallo richiesto. Se più valori sono idonei, sceglie quello più vicino al punto medio geometrico delle conte, facilitando le comuni serie decimali. Se nessuna potenza di dieci è adatta, raccomanda il fattore esatto diretto a quel punto medio. La frazione di diluizione è il reciproco del fattore: 100,000 equivale a 0.00001 e viene mostrato come 1:100000. Verifichi che la conta prevista per la raccomandazione rientri nei limiti inclusivi impostati.

Trasformi il risultato in un piano di conta affidabile

Usi la raccomandazione per scegliere un livello di diluizione, senza sostituire un protocollo microbiologico completo. Il fattore totale può essere ottenuto con uno o più passaggi convalidati, purché i rispettivi fattori vengano moltiplicati. Trasferimenti decimali ripetuti consentono di raggiungere una potenza di dieci, ma ogni passaggio richiede comunque volumi adeguati, miscelazione completa, tecnica sterile e strumenti calibrati. Lo strumento non prescrive i volumi delle provette, perché dipendono dalle pipette disponibili, dai minimi volumi trasferibili, dagli effetti di matrice e dal metodo approvato. Se la densità stimata è incerta, semini la diluizione raccomandata insieme a una meno diluita e una più diluita; aumenta così la probabilità di ottenere almeno una piastra contabile. Le repliche aiutano inoltre a valutare la variabilità tecnica. Dopo l’incubazione, calcoli la densità finale usando la diluizione realmente applicata, il volume seminato e le conte accettate, non la stima iniziale. Se persino il campione non diluito risulta sotto il minimo, diluire non crea organismi: aumenti il volume, concentri il campione con un metodo convalidato o riveda l’intervallo. Ogni richiesta API costa $0.002, non usa la rete e non conserva dati sperimentali. Segua sempre le norme di biosicurezza e il metodo approvato del laboratorio.