Diluizione a OD obiettivo

Inserisca la OD iniziale misurata, la OD desiderata e il volume finale in millilitri. Il risultato fornisce i volumi da pipettare per entrambi i componenti e il fattore di diluizione. È pensato per la pianificazione ordinaria di colture batteriche, lieviti e altre colture in sospensione quando entrambe le misure di OD usano la stessa lunghezza d’onda e lo stesso metodo.

Inserisca misure direttamente confrontabili

Parta dalla densità ottica della coltura densa, dalla densità ottica inferiore richiesta per la fase successiva e dal volume totale che desidera preparare. Le letture iniziale e obiettivo devono provenire dalla stessa lunghezza d’onda, dallo stesso metodo strumentale e da cuvette o recipienti compatibili. La densità ottica è una misura relativa della torbidità: combinare letture raccolte in condizioni diverse può quindi produrre una diluizione aritmeticamente corretta ma biologicamente fuorviante. Usi una OD iniziale che rappresenti la coltura nel momento in cui preleverà l’aliquota. Se lo strumento ha un intervallo lineare limitato, misuri un campione opportunamente diluito e corregga la lettura prima di inserirla. Indichi in millilitri il volume totale della preparazione, non il volume di terreno già disponibile. L’obiettivo non deve superare la OD iniziale perché questo calcolatore aggiunge soltanto terreno fresco e non può concentrare una coltura. Tutti e tre i valori devono essere finiti e maggiori di zero. Prima di pipettare, verifichi che il volume di coltura calcolato sia adeguato all’intervallo di precisione della pipetta o del sistema di dispensazione disponibile.

Comprenda il calcolo e i volumi restituiti

Il calcolatore applica la conservazione del prodotto OD-volume, comunemente espressa come OD iniziale moltiplicata per volume di coltura uguale a OD obiettivo moltiplicata per volume finale. Riordina questa relazione per ricavare il volume di coltura, quindi sottrae tale volume da quello finale richiesto per ottenere il volume di terreno fresco. Il fattore di diluizione è la OD iniziale divisa per la OD obiettivo. Per esempio, una diluizione di sei volte impiega una parte di coltura su sei parti totali, mentre le cinque parti restanti sono terreno fresco. I valori riportati vengono arrotondati soltanto per produrre un risultato stabile e leggibile; il calcolo sottostante utilizza direttamente i numeri inviati. Il volume finale compare nuovamente nel risultato, così Lei può controllare la preparazione senza tornare ai dati inseriti. Si presume che la densità ottica sia proporzionale alla concentrazione cellulare nell’intervallo pertinente. Questa ipotesi è utile per la pianificazione ordinaria, ma non compensa una risposta strumentale non lineare, sedimentazione, aggregazione, bolle, un bianco errato o le differenze tra conta vitale e torbidità.

Prepari, misceli e verifichi la coltura diluita

Trasferisca il volume di coltura calcolato in un recipiente pulito e aggiunga il volume calcolato di terreno fresco fino a raggiungere il totale richiesto. Misceli accuratamente con un metodo adatto all’organismo e al recipiente, perché un campione non omogeneo può generare una lettura di OD non rappresentativa della preparazione. Usi un terreno con la stessa formulazione e le stesse caratteristiche di bianco previste dal protocollo successivo. Per aliquote piccole, scelga una pipetta il cui intervallo operativo includa agevolmente il risultato; se l’aliquota necessaria è troppo ridotta per un trasferimento affidabile, prepari una diluizione intermedia oppure aumenti il volume finale mantenendo lo stesso rapporto. Dopo la miscelazione, misuri di nuovo la OD quando l’accuratezza è importante. La normale variabilità sperimentale, la precisione dello strumento, il liquido residuo nei puntali e l’eterogeneità della coltura possono allontanare il valore osservato dall’obiettivo matematico. Questo strumento pianifica una diluizione diretta in un solo passaggio e non modella la crescita successiva, la fase di latenza, la morte cellulare o i cambiamenti durante l’incubazione. Registri la lettura iniziale, i volumi calcolati, il lotto del terreno e la lettura di verifica per garantire la riproducibilità.