Diluição para placa contável

Informe a densidade viável estimada em CFU por mililitro, o volume aplicado em uma placa e os limites inclusivos de colônias que você aceita no seu método. O resultado apresenta o fator e a fração recomendados, a contagem prevista e toda a faixa de diluições aceitáveis. Uma potência de dez prática tem prioridade quando permanece na faixa; caso contrário, usa-se o alvo exato do ponto médio.

Informe uma estimativa compatível com o plaqueamento

Comece pela concentração estimada de microrganismos viáveis na amostra original, expressa em unidades formadoras de colônias por mililitro. Ela pode vir de uma contagem viável anterior, de uma curva de crescimento validada ou de outra estimativa justificável e deve representar a amostra antes da diluição. Em seguida, informe em mililitros o volume que realmente será aplicado em uma placa. Um plaqueamento por espalhamento de 100 microlitros corresponde a 0.1 mililitros, enquanto um plaqueamento em profundidade de 1 mililitro usa 1. O volume participa diretamente do cálculo: dobrá-lo dobra a contagem prevista para a mesma densidade e diluição. Por fim, defina os limites inclusivos adequados ao método, organismo, meio e procedimento do seu laboratório. A calculadora não impõe uma faixa universal, pois métodos validados podem adotar critérios diferentes. Trate a resposta como apoio ao planejamento, não como garantia. Agregação, viabilidade, homogeneização, pipetagem, recuperação no meio e variação biológica podem alterar a observação. Quando houver incerteza relevante, prepare diluições vizinhas e réplicas. Converta microlitros em mililitros antes de preencher o volume.

Interprete a faixa e a recomendação de diluição

O cálculo começa pela contagem esperada sem diluição: CFU estimadas por mililitro multiplicadas pelos mililitros plaqueados. A divisão desse valor pelo fator de diluição fornece as colônias previstas. O menor fator aceitável corresponde ao limite superior de colônias, e o maior fator corresponde ao limite inferior. Como um fator menor que um indicaria concentração, e não diluição, a faixa é limitada a fatores iguais ou superiores a um. A calculadora procura primeiro uma potência de dez, como 100, 1,000 ou 100,000, cuja previsão permaneça dentro da faixa solicitada. Se houver mais de uma, seleciona aquela mais próxima do ponto médio geométrico das contagens, facilitando séries decimais usuais. Quando nenhuma potência de dez é adequada, recomenda o fator exato direcionado a esse ponto médio. A fração de diluição é o inverso do fator: um fator de 100,000 corresponde a 0.00001 e aparece como 1:100000. Confira se a contagem esperada da recomendação está entre os limites inclusivos definidos por você.

Transforme o resultado em um plano de contagem confiável

Use a recomendação para escolher um nível de diluição, sem substituir um protocolo microbiológico completo. O fator total pode ser obtido por uma ou várias etapas validadas, desde que seus fatores sejam multiplicados. Transferências decimais repetidas alcançam potências de dez, mas cada etapa ainda exige volumes apropriados, mistura completa, técnica estéril e equipamentos calibrados. A ferramenta não determina volumes de tubos porque essas decisões dependem das pipetas disponíveis, dos volumes mínimos transferíveis, dos efeitos da matriz e do método aprovado. Se a estimativa de densidade for incerta, plaqueie a diluição recomendada, uma menos diluída e outra mais diluída; isso aumenta a chance de obter ao menos uma placa contável. Réplicas também ajudam a revelar variação técnica. Após a incubação, calcule a densidade final com a diluição realmente aplicada, o volume plaqueado e as contagens aceitas, e não com a estimativa inicial. Se até a amostra sem diluição ficar abaixo do mínimo, diluir não cria organismos: aumente o volume, concentre a amostra por método validado ou reveja a faixa. Cada solicitação à API custa US$ 0,002, não acessa a rede e não armazena dados experimentais. Siga sempre as normas de biossegurança e o método aprovado do seu laboratório.