Dilución para una placa contable

Introduzca la densidad viable estimada en CFU por mililitro, el volumen depositado en una placa y los límites inclusivos de colonias que usted considera contables. El resultado muestra el factor y la fracción de dilución recomendados, el recuento previsto y todo el intervalo de diluciones admisibles. Se prioriza una potencia de diez práctica cuando permanece dentro del intervalo; de lo contrario, se usa el punto medio exacto.

Introduzca una estimación acorde con el método de siembra

Comience con la concentración estimada de microorganismos viables en la muestra original, expresada en unidades formadoras de colonias por mililitro. Puede proceder de un recuento viable anterior, una curva de crecimiento validada u otra estimación justificable, y debe describir la muestra antes de diluirla. Indique después el volumen real que llegará a una placa, en mililitros. Una siembra por extensión de 100 microlitros equivale a 0.1 mililitros, mientras que una siembra en profundidad de 1 mililitro usa 1. El volumen interviene de forma directa: duplicarlo duplica las colonias esperadas con la misma densidad y dilución. Por último, establezca los límites inclusivos apropiados para su método, organismo, medio y procedimiento. La calculadora no impone un intervalo universal, ya que los métodos validados difieren. Considere el resultado una recomendación de planificación, no una garantía. La agregación celular, la viabilidad, la mezcla, el pipeteo, la recuperación y la variación biológica pueden alterar el recuento. Si hay mucha incertidumbre, prepare diluciones vecinas y réplicas. Convierta siempre los microlitros a mililitros antes de enviar los datos.

Interprete el intervalo y la recomendación de dilución

El cálculo comienza con el recuento sin diluir previsto: CFU estimadas por mililitro multiplicadas por los mililitros sembrados. Al dividir ese valor por el factor de dilución se obtienen las colonias esperadas. El menor factor aceptable corresponde al límite superior de colonias y el mayor, al límite inferior. Como un factor inferior a uno representaría concentración y no dilución, el intervalo se limita a factores iguales o superiores a uno. La calculadora busca primero una potencia de diez, como 100, 1,000 o 100,000, cuyo recuento previsto permanezca dentro del intervalo solicitado. Si hay varias, elige la más cercana al punto medio geométrico de los recuentos, lo que facilita el diseño de series decimales. Si ninguna potencia de diez sirve, recomienda el factor exacto dirigido a ese punto medio. La fracción de dilución es el recíproco del factor: un factor de 100,000 equivale a 0.00001 y se presenta como 1:100000. Compruebe que las colonias previstas de la recomendación estén dentro de sus límites inclusivos.

Convierta el resultado en un plan de recuento defendible

Utilice la recomendación para seleccionar un nivel de dilución, no para sustituir un protocolo microbiológico completo. El factor total puede obtenerse con uno o varios pasos validados cuyos factores se multipliquen. Las transferencias decimales repetidas permiten alcanzar una potencia de diez, pero cada paso sigue requiriendo volúmenes adecuados, mezcla completa, técnica estéril y material calibrado. La herramienta no prescribe volúmenes de tubos porque dependen de las pipetas disponibles, los volúmenes mínimos transferibles, los efectos de matriz y el método aprobado. Si la densidad estimada es incierta, siembre la dilución recomendada y una dilución vecina a cada lado; así aumenta la probabilidad de obtener al menos una placa contable. Las réplicas también ayudan a evaluar la variación técnica. Tras la incubación, calcule la densidad final con la dilución realmente usada, el volumen sembrado y los recuentos aceptados, no con la estimación inicial. Si incluso la muestra sin diluir queda por debajo del mínimo, diluir no puede crear organismos: aumente el volumen, concentre la muestra mediante un método validado o revise el intervalo. Cada solicitud a la API cuesta $0.002, no usa red y no conserva datos experimentales. Aplique siempre las normas de bioseguridad y el procedimiento aprobado de su laboratorio.