Dilución a OD objetivo

Introduzca la OD inicial medida, la OD deseada y el volumen final en mililitros. El resultado indica los volúmenes de ambos componentes y el factor de dilución. Está pensada para planificar diluciones rutinarias de bacterias, levaduras y otros cultivos en suspensión cuando ambas mediciones de OD utilizan la misma longitud de onda y el mismo método.

Introduzca mediciones directamente comparables

Comience con la densidad óptica del cultivo denso, la densidad óptica inferior necesaria para el siguiente paso y el volumen total que desea preparar. Las lecturas inicial y objetivo deben proceder de la misma longitud de onda, del mismo método instrumental y de cubetas o recipientes compatibles. La densidad óptica es una medida relativa de turbidez, por lo que combinar lecturas obtenidas en condiciones diferentes puede producir una dilución matemáticamente correcta, pero biológicamente engañosa. Utilice una OD inicial que represente el cultivo en el momento de extraer la alícuota. Si el instrumento tiene un intervalo lineal limitado, mida una muestra diluida adecuadamente y corrija esa lectura antes de introducirla. Indique el volumen final de la preparación en mililitros, no el volumen de medio que ya tiene disponible. El objetivo no puede superar la OD inicial porque esta calculadora solo añade medio fresco y no puede concentrar un cultivo. Los tres valores deben ser finitos y mayores que cero. Antes de pipetear, compruebe que el volumen de cultivo calculado resulte práctico para el intervalo de precisión de la pipeta o del sistema dispensador disponible.

Comprenda el cálculo y los volúmenes obtenidos

La calculadora aplica la conservación del producto OD-volumen, que suele expresarse como OD inicial multiplicada por volumen de cultivo igual a OD objetivo multiplicada por volumen final. Reordena esta relación para hallar el volumen de cultivo y luego lo resta del volumen final solicitado para obtener el volumen de medio fresco. El factor de dilución es la OD inicial dividida por la OD objetivo. Por ejemplo, una dilución de seis veces utiliza una parte de cultivo en seis partes totales, mientras que las cinco restantes corresponden a medio fresco. Los valores se redondean únicamente para ofrecer una salida estable y legible; el cálculo subyacente utiliza directamente los números enviados. El volumen final se repite en el resultado para que pueda revisar la preparación sin volver a consultar la entrada. Se presupone que la densidad óptica es proporcional a la concentración celular dentro del intervalo pertinente. Esta suposición es útil para planificar diluciones rutinarias, pero no corrige una respuesta instrumental no lineal, la sedimentación, los agregados, las burbujas, un blanco incorrecto ni las diferencias entre recuento viable y turbidez.

Prepare, mezcle y verifique el cultivo diluido

Transfiera el volumen de cultivo calculado a un recipiente limpio y añada el volumen calculado de medio fresco hasta alcanzar el total solicitado. Mezcle bien con un método adecuado para el organismo y el recipiente, ya que una muestra sin homogeneizar puede dar una lectura de OD que no represente la preparación. Utilice un medio con la misma formulación y las mismas características de blanco que exige el protocolo posterior. Para alícuotas pequeñas, elija una pipeta cuyo intervalo de trabajo incluya holgadamente el resultado; si la alícuota necesaria es demasiado pequeña para transferirla con fiabilidad, prepare una dilución intermedia o aumente el volumen final conservando la misma proporción. Después de mezclar, vuelva a medir la OD cuando la exactitud sea importante. La variación experimental normal, la precisión del instrumento, el líquido residual en las puntas y la heterogeneidad del cultivo pueden alejar la lectura observada del objetivo matemático. Esta herramienta planifica una dilución directa de un solo paso y no modela el crecimiento posterior, la fase de latencia, la muerte celular ni los cambios durante la incubación. Registre la lectura inicial, los volúmenes calculados, el lote de medio y la lectura de verificación para garantizar la reproducibilidad.