Verdünnung auf Ziel-OD

Geben Sie die gemessene Ausgangs-OD, die gewünschte OD und das Endvolumen in Millilitern ein. Das Ergebnis nennt die Pipettiervolumina beider Bestandteile sowie den Verdünnungsfaktor. Der Rechner eignet sich für die routinemäßige Planung von Bakterien-, Hefe- und anderen Suspensionskulturen, sofern beide OD-Messungen dieselbe Wellenlänge und Methode verwenden.

Geben Sie unmittelbar vergleichbare Messwerte ein

Beginnen Sie mit der optischen Dichte der konzentrierten Kultur, der für den nächsten Schritt benötigten niedrigeren optischen Dichte und dem insgesamt herzustellenden Volumen. Ausgangs- und Zielmesswert müssen mit derselben Wellenlänge, derselben Gerätemethode und kompatiblen Gefäßen oder Küvetten erfasst worden sein. Die optische Dichte ist ein relatives Maß für die Trübung. Werden Messwerte aus unterschiedlichen Bedingungen kombiniert, kann die Verdünnung rechnerisch richtig, biologisch jedoch irreführend sein. Verwenden Sie eine Ausgangs-OD, die den Zustand der Kultur zum Zeitpunkt der Aliquotentnahme repräsentiert. Besitzt das Gerät nur einen begrenzten linearen Bereich, messen Sie eine passend vorverdünnte Probe und korrigieren Sie den Wert vor der Eingabe. Tragen Sie das gewünschte Präparationsvolumen in Millilitern ein, nicht das bereits vorhandene Mediumvolumen. Die Ziel-OD darf die Ausgangs-OD nicht überschreiten, da dieser Rechner ausschließlich frisches Medium zugibt und keine Kultur konzentrieren kann. Alle drei Werte müssen endlich und größer als null sein. Prüfen Sie vor dem Pipettieren, ob das berechnete Kulturvolumen im zuverlässigen Genauigkeitsbereich der verfügbaren Pipette oder Dosiertechnik liegt.

Verstehen Sie Berechnung und ausgegebene Volumina

Der Rechner nutzt die Erhaltung des OD-Volumen-Produkts: Ausgangs-OD multipliziert mit Kulturvolumen ist gleich Ziel-OD multipliziert mit Endvolumen. Durch Umstellen dieser Beziehung wird zunächst das Kulturvolumen bestimmt. Anschließend wird es vom gewünschten Endvolumen abgezogen, um das Volumen des frischen Mediums zu erhalten. Der Verdünnungsfaktor entspricht der Ausgangs-OD geteilt durch die Ziel-OD. Bei einer sechsfachen Verdünnung besteht das Gesamtvolumen beispielsweise aus einem Teil Kultur und fünf Teilen frischem Medium. Die ausgegebenen Werte werden nur für eine stabile und gut lesbare Darstellung gerundet; für die eigentliche Berechnung werden die eingegebenen Zahlen direkt verwendet. Das Endvolumen erscheint nochmals im Ergebnis, damit Sie die Zubereitung ohne Rückgriff auf die Eingabe kontrollieren können. Vorausgesetzt wird, dass die optische Dichte im relevanten Bereich proportional zur Zellkonzentration ist. Diese Annahme ist für die Routineplanung nützlich, korrigiert jedoch keine nichtlineare Gerätereaktion, Sedimentation, Zellaggregate, Luftblasen, ungeeignete Leerwerte oder Unterschiede zwischen lebensfähiger Zellzahl und Trübung.

Bereiten Sie die Verdünnung vor und überprüfen Sie sie

Überführen Sie das berechnete Kulturvolumen in ein sauberes Gefäß und geben Sie das berechnete Volumen frischen Mediums hinzu, bis das gewünschte Gesamtvolumen erreicht ist. Mischen Sie mit einer für Organismus und Gefäß geeigneten Methode gründlich, denn eine inhomogene Probe kann eine OD liefern, die das Präparat nicht repräsentiert. Verwenden Sie ein Medium mit derselben Zusammensetzung und denselben Eigenschaften für die Leerwertmessung, die das nachfolgende Protokoll voraussetzt. Wählen Sie für kleine Kulturaliquote eine Pipette, deren Arbeitsbereich das Ergebnis sicher abdeckt. Ist das benötigte Aliquot für eine zuverlässige Übertragung zu klein, stellen Sie eine Zwischenverdünnung her oder erhöhen Sie das Endvolumen bei unverändertem Verhältnis. Messen Sie die OD nach dem Mischen erneut, wenn hohe Genauigkeit erforderlich ist. Normale experimentelle Streuung, Gerätepräzision, Flüssigkeitsreste in Spitzen und eine heterogene Kultur können den beobachteten Wert vom rechnerischen Ziel abweichen lassen. Dieses Werkzeug plant eine direkte, einstufige Verdünnung; späteres Wachstum, Lag-Phase, Zelltod oder Veränderungen während der Inkubation werden nicht modelliert. Dokumentieren Sie Ausgangsmesswert, berechnete Volumina, Mediumcharge und Kontrollmessung, um die Reproduzierbarkeit sicherzustellen.